COC1人卵巢癌細(xì)胞


細(xì)胞名稱:        COC1人卵巢癌細(xì)胞

種屬來源:        人

組織來源:        卵巢

疾病特征:        卵巢癌

細(xì)胞形態(tài):        淋巴母細(xì)胞樣

生長特性:        懸浮生長

培 養(yǎng)  基:        RPMI-1640,，90%,；FBS，10%,。

生長條件:        氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%; 溫度：37 ℃, 

傳代方法:        1：2至1：6,，每周2次。

凍存條件:        90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO,，液氮儲存

支原體檢測:      陰性

特點和簡介
COC1細(xì)胞建系于1993年,。細(xì)胞于原代培養(yǎng)至17天傳代，以后反復(fù)傳代,，生物學(xué)特性穩(wěn)定,。可表達(dá)多種腫瘤標(biāo)志物和型P53蛋白,、突變型P53蛋白,。裸鼠接種產(chǎn)生分化差的腺癌。

COC1人卵巢癌細(xì)胞 接受后處理
1) 收到細(xì)胞后,，請檢查是否漏液 ,，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們,。

2) 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長 狀態(tài),，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。

3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基,。

4) 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請及 時進(jìn)行細(xì)胞傳代,，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

5) 接到細(xì)胞次日,，請檢查細(xì)胞是 否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系,。

培養(yǎng)操作
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識,。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

COC1人卵巢癌細(xì)胞培養(yǎng)注意事項
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基,、血清比例,、所 需細(xì)胞因子 等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問 題,，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運輸問題貼壁細(xì)胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察,。此時多數(shù)細(xì)胞均 會貼壁,，若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍(lán) 染色測定細(xì)胞活力，如果證實細(xì)胞活力正常,， 請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng),；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次,。

4. 靜置細(xì)胞貼壁后,，請將細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng),，待細(xì) 胞匯 合度  80%左右時正常傳代,。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,，細(xì)胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和我司技術(shù) 部 溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián) 系，告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決,。

7.該細(xì)胞僅供科研使用。